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Western及IP細(xì)胞裂解液

簡要描述:Western及IP細(xì)胞裂解液
本產(chǎn)品裂解細(xì)胞獲得的裂解產(chǎn)物,可用于PAGE,蛋白印跡(Western Blot),免疫沉淀(immnolprecipitation,IP),免疫共沉淀(co-IP) 和蛋白與多肽的分離純化。

  • 產(chǎn)品型號(hào):C-0013
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2023-05-20
  • 訪  問  量: 789

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詳細(xì)介紹

品牌Bioss貨號(hào)C-0013
供貨周期現(xiàn)貨應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

Western及IP細(xì)胞裂解液

保存條件 Store at -20℃ stable for 12 months.

Western及IP細(xì)胞裂解液

產(chǎn)品簡介

WIP組織細(xì)胞裂解液(Tissue and Cell lysis solution for Western Blot and Immunoprecipitation ),是一種在非變性條件下裂解細(xì)胞的裂解液。本產(chǎn)品裂解細(xì)胞獲得的裂解產(chǎn)物,可用于PAGE,蛋白印跡(Western Blot),免疫沉淀(immnolprecipitation,IP),免疫共沉淀(co-IP) 和蛋白與多肽的分離純化。

WIP裂解液的主要成分為Tris(pH 7.5,20mM),150mM NaCl,去垢劑Triton X-100以及多種蛋白酶抑制劑,無需自備PMSF、磷酸酶抑制劑等蛋白酶抑制劑。WIP不僅可以用于細(xì)胞培養(yǎng)物的裂解,也可直接用于大多數(shù)動(dòng)物組織的裂解。在有效地裂解組織和細(xì)胞的同時(shí),可強(qiáng)烈地抑制蛋白、多肽的降解,并保持原有的分子結(jié)構(gòu)和蛋白間相互作用。

用WIP裂解得到的組織細(xì)胞蛋白樣品,可以用博奧森生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質(zhì),不能用Bradford試劑盒測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。


包裝清單

WIP組織細(xì)胞裂解液        30ml

PMSF(100X)             0.3ml


保存條件:

-20°C保存,一年有效。


注意事項(xiàng):

1.為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)效果,可適當(dāng)分裝使用,以盡量避免反復(fù)凍融。

2.PMSF應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)加。

3.裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4°C進(jìn)行。

4.蛋白酶抑制劑均有較高的毒性,為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。一旦直接接觸,請立即用流水沖洗,再向醫(yī)療保健結(jié)構(gòu)咨詢。



二.使用方法說明

1.培養(yǎng)細(xì)胞

取出WIP裂解液,待融化后,顛倒混勻數(shù)次,適量分裝凍存。在使用前取出,按比例加入PMSF(使其最終濃度為1mM),混勻,立即使用。

貼壁細(xì)胞,去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗2-3遍(如血清中的蛋白沒有干擾,也可以不洗)。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入WIP。用槍吹打數(shù)下,使WIP和細(xì)胞充分接觸。通常WIP接觸細(xì)胞數(shù)秒后細(xì)胞就會(huì)被裂解。

懸浮細(xì)胞,收集培養(yǎng)細(xì)胞,離心去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗2-3遍(如血清中的蛋白沒有干擾,也可以不洗),用手指把細(xì)胞用力彈散,按6孔板每孔細(xì)胞加入100-200微升的比例加入WIP。如果細(xì)胞數(shù)量較大,應(yīng)按50-100萬細(xì)胞/管分裝或根據(jù)細(xì)胞數(shù)量按比例增加WIP。用手指輕彈管底以促進(jìn)WIP和細(xì)胞充分接觸,裂解*時(shí)應(yīng)無明顯的細(xì)胞顆粒。

裂解物經(jīng)10,000-14,000g離心3-5分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量說明:通常6孔板每孔細(xì)胞加入100微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150微升或200微升。

2.組織樣品

取Ep管,分別稱重標(biāo)記,把組織切成小塊裝入Ep管中,稱重。按每20毫克組織加100-200微升的比例加入WIP(如裂解不*,可以適當(dāng)增加WIP的用量;如需要的蛋白樣品濃度較高,可以適當(dāng)減少WIP的用量)。用手握式電動(dòng)組織細(xì)胞勻漿器勻漿約1分鐘或直至充分裂解。10,000-14,000g離心3-5分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

如果組織樣品本身非常細(xì)小,如淋巴細(xì)胞,可直接加入WIP裂解,通過振蕩(Vortex)以使樣品裂解*


 


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